花生粕、豆类粕 凯氏定氮测定粗蛋白方法

农作物在人类生活中不可缺少的一部分，为人类饮食健康提供很大的帮助，特点是花生与豆类为人类提供大量能量需求，下面为用凯氏定氮仪测定花生粕和豆类粕粗蛋白含案例提供分享。

免水凯氏定氮仪

用于测定有机物的含氮量,若蛋白质的含氮量已知时，则可用此法测定样品中蛋白质的含量。当蛋白质与浓硫酸共热时，其中的碳、氢两元素被氧化成二氧化碳和水，而氮则转变成氨，并进一步与硫酸作用生成硫酸铵。此过程通常称为“消化”。但是，这个反应进行得比较缓慢，通常需要加入硫酸钾或硫酸钠以提高反应液的沸点，并加入硫酸铜作为催化剂，以促进反应的进行。

消化完成后，在凯氏定氮仪中加入浓碱，可使消化液中的硫酸铵分解，游离出氨，借助水蒸汽蒸馏法，将产生的氨蒸馏到一定量、一定浓度的硼酸溶液中，硼酸吸收氨后，氨与溶液中氢离子结合，使溶液中的氢离子浓度降低，指示剂颜色改变，然后用标准无机盐酸滴定，直至恢复溶液中原来的氢离子浓度为止。根据所用标准盐酸的量可计算出待测物中的总氮量。蛋白质的含氮量为16%，即1克蛋白质中的氮相当于6.25克蛋白质，用凯氏定氮法测出的含氮量乘以6.25,即得样品中蛋白质的含量。

1 实验材料

1.1 器材

凯氏定氮仪 、石墨消解仪、300ml凯氏烧瓶 4个； 移液管；锥形瓶； 试管； 小玻璃珠

1.2 试剂

98%浓硫酸分析纯；

35％氢氧化钠溶液；

2％硼酸溶液；

标准盐酸溶液(0.01mol／L)。 

粉末硫酸钾—硫酸铜混合物：K2SO4与CuSO4·5H2O以3：1配比研磨混合。

混合指示剂(田氏指示剂)：由50ml 0.1％甲烯蓝乙醇溶液与200ml 0.1％甲基红乙醇溶液混合配成，贮于棕色瓶中备用。

样品溶液：配制3mg/ml的牛血清白蛋白溶液作为样品。

2 实验步骤

消化：

取4个300ml凯氏烧瓶并标号,各加1颗玻璃珠，在1号及2号瓶中各加样品1ml，催化剂(K2SO4-CuSO4·5H2O)200 mg，浓硫酸5 ml。注意加样品时应直接送入瓶底，而不要沾在瓶口和瓶颈上。在3号及4号瓶中各加1ml蒸馏水和与1、2号瓶相同量的催化剂和浓硫酸，作为对照。在通风橱内进行消化。在消化开始时应控制火力，不要使液体冲到瓶颈。待硫酸开始分解并放出SO2白烟后，适当加强火力，继续消化，直至消化液呈透明淡绿色为止。撤掉火力，冷却至室温。

蒸馏器的洗涤：

用水洗涤干净微量凯氏定氮仪，在蒸汽发生器中加入用几滴硫酸酸化的蒸馏水和几滴甲基红指示剂，用这样的水蒸气洗涤凯氏定氮仪。约15分钟后，在冷凝器下端倾斜放好装有硼酸-指示剂的锥形瓶，继续蒸汽洗涤2分钟，观察锥形瓶内的溶液是否变色，如不变色则证明蒸馏装置内部已洗涤干净。移走锥形瓶，停止加热，打开夹子。

蒸馏：

设定取30％的氢氧化钠溶液10ml，向玻璃杯中加入蒸馏水约5ml稀释液，设定蒸馏时间5分钟，开始蒸馏。氨气进入锥形瓶，瓶中的酸溶液由紫色变成绿色。再继续下一个蒸馏操作。待样品和对照均蒸馏完毕后，同时进行滴定。

滴定：

用0.01mol／L的标准盐酸溶液滴定各锥形瓶中收集的氨量，硼酸指示剂溶液由绿色变淡紫色为滴定终点。 

3 结果计算

其中： A为滴定样品用去的盐酸溶液平均ml数； B为滴定对照液用去的盐酸溶液平均ml数； C为所取样品溶液的ml数。

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