一材料与方法

1.主要材料

重组禽流感病毒(H9N2亚型，JY株)原液，由哈药集团生物疫苗有限公司提供，禽流感病毒由H9亚型HI试验抗原，由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所提供,21 – 28日龄SPF 鸡，由山东济南斯帕法斯家禽有限公司提供• SPF种蛋，哈药集团生物疫苗有限公司自行孵化出雏饲养所需日龄。

2.主要试剂。

国内外四个不同企业的白油编号为A. B, C、D.

3.主要仪器与设备

普通恒温培养箱、干热灭菌箱、八道数字式可调微址移液器.Tip头.禽用负压隔离器、孵化器、水平层流净化工作台、乳化机、黏度计、微量放血凝板. 微量振获器等。

4.试验方法

选择国内和国外四家白油A，B, C.D)，并与乳化工艺中乳化机的三种频率(30HZ，40HZ，50HZ)做交叉试验，共制备出12种不同的配比试验产品(表1 > • 根据兽用生物制品生产和检 验规程，分別进行性状检验.无菌检验、安全检验和效力检验，根据结果综合评定用禽流感j y株的最优白油佐剂及乳化机频率•

二、结果与分析

1.性状检验

12个样品交叉试验结果外观均为乳白色乳状液，油包水剂型，黏度测定B-40值最低，检验结采均合格(见衣2>, 但D-30 组表现粘度明显高于其他白油所乳化的疫苗，在动物免疫时.可能会造成注射费力，吸收缓慢，应激增大, 抗体低下，

2.无菌检验。

交叉试验的12个样品，经TG小瓶3d后移植，TG、 CA. GP培养7d后无菌检验结果均为阴性，无菌生长(表略)。

3.安全检验。

交叉试验的12个样品的免疫鸡只免疫后14d全部健活，且没出现由因疫苗引起的局部和全身不良反应(犮略h

4.效力检验。

效力检验结果：

A—30 为 8 • 5 log2，B—30 为 8 • 7 log2 •

C-30 为 8.71og2,D-30 为 8.4 Iog2.

A-40 为8.91og2, B-40为9.11og2.

C-40为8.81og2. D-40为8_5tog2,

A-50为8.81og2. B-50为9.01og2,

C-50 为 8.81og2,D-50 为 8.61og2,

均达到国家标准：免疫鸡HI抗体效价均高于1：64 (61og2),对照鸡HI抗体效价均低于 1 ：4 (21og2)(表略)。最终确定B-40为最优组合.乳化机频率为40HZ。